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Inhalt

 

1       Einleitung

 

1.1  Koagulasenegative Staphylokokken

1.1.1        Taxonomie

1.1.2        Epidemiologie von Erkrankungen durch koagulasenegative Staphylokokken

1.1.3        Pathomechanismen

 

1.2  Voraussetzungen für diese Arbeit

 

1.3  Ziele der Arbeit

 

2       Material und Methoden

 

2.1  Material

2.1.1        Geräte

2.1.2        Chemikalien

2.1.3        Enzyme

2.1.4        Oligonucleotide

2.1.5        Nährmedien

2.1.6        Organismen

2.1.7        Datenbanken und Programme

 

2.2  Methoden

2.2.1        Biofilmtestung

2.2.2        Präparation chromosomaler DNA von S. epidermidis

2.2.3        Präparation von Plasmid-DNA aus E. coli

2.2.4        Restriktionsenzymverdau von Plasmid- und chromosomaler DNA

2.2.5        DNA-Fragmentauftrennung durch Agarose-Gelelektrophorese

2.2.6        DNA Aufreinigung aus Agarosegelen

2.2.7        Ligationsreaktionen in Vektor pBluescript® II SK und TOPO-Vektor

2.2.8        Plasmidtransformation in E. coli

2.2.9        DNA-Blotting mit Posiblotter

2.2.10    DNA-Blotting

2.2.11    Radioaktive Hybridisierung

2.2.12    DNA-Sequenzierung

2.2.13    Automatische DNA-Sequenzierung

2.2.14    Polymerasekettenreaktion

 

3       Ergebnisse

 

3.1  Optimierung des Klonierungssystems

 

3.2  Klonierungsstrategien

 

3.3  Nachweis der Identität der Klone

3.3.1        Kartierung der klonierten Plasmide

3.3.2        Hybridisierungsuntersuchungen mit den klonierten Sonden

 

3.4  Untersuchung von Wildtypstämmen mit den erhaltenen Sonden

 

3.5  Sequenzierung der klonierten Fragmente

3.5.1        Kurzstreckige Sequenzierung mit S35-markierten Nukleotiden

3.5.2        Langstreckige automatische Sequenzierung

 

3.6  Amplifikation von sigB

 

3.7  Sequenzierung des sigB-Amplifikats

 

3.8  Hybridisierung mit sB-spezifischen Sonden

 

3.9  Weitergehende phänotypische Untersuchungen

 

3.9.1        Biofilmbildung in NaCl-supplementiertem Medium

3.9.2        Biofilmbildung in Ethanol-supplementiertem Medium

 

4       Diskussion

 

5       Zusammenfassung

 

6       Literaturverzeichnis

 

7       Danksagung

 

8       Lebenslauf

 

Erklärung

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