5. Zusammenfassung
Apolipoprotein (Apo) B kann in zwei verschiedenen Formen exprimiert werden: Apo B-100, das Hauptstrukturmolekül der LDL und das die aminoterminalen 48 % umfassende Apo B-48, ein wichtiger Bestandteil der Chylomikronen. Im menschlichen Dünndarm sowie in der Leber der Ratte und anderer Säuger kann in der Apo B mRNA an Nukleotidposition 6666 Cytidin durch Deaminierung in Uridin umgewandelt werden, wodurch aus dem für die Aminosäure Glutamin kodierenden Triplet ein translationales Stop-Codon entsteht. Diese Form der posttranskriptionellen Modifikation der Apo B mRNA – genannt Apo B mRNA Editing - wird durch einen Enzymkomplex katalysiert. Bisher konnte nur dessen katalytische Untereinheit APOBEC-1 ( Apo B mRNA editing enzyme component 1) kloniert und ausführlich charakterisiert werden. In der vorliegenden Untersuchung wurde mittels Two-Hybrid-Selektion in Hefen eine Rattenleber cDNA-Genbank nach weiteren Komponenten des Apo B mRNA Editing Enzymkomplexes durchsucht. Wir konnten so eine Interaktion von APOBEC-1 mit dem hnRNP C1 Protein nachweisen. Eine Mutagenese-Untersuchung, in der verschiedene Trunkierungen von APOBEC-1 und von hnRNP C1 in dem Hefesystem nicht miteinander interagierten, zeigte das hohe Maß an Spezifität der identifizierten Interaktion. Wir konnten zeigen, daß rekombinantes hnRNP C1 Protein die enzymatische Aktivität des partiell aus Rattendünndarm aufgereinigtem Apo B mRNA Editing Enzymkomplex inhibiert. Die hnRNP C1 Deletionsmutante M104, welche die RNA-Bindungsdomäne des Proteins umfaßt, bewirkte in gleichartigen Experimenten keine Inhibition der Editingreaktion. So konnte ausgeschlossen werden, daß der inhibierende Effekt auf die Editingreaktion auf einer unspezifischen Substratbindung durch hnRNP C1 Protein beruht. hnRNP C1 Protein ist ein hochexprimiertes Kernprotein, das naszierende RNA während der Transkription bindet und eine wichtige Rolle bei der Formierung von Spleißosomen spielt. hnRNP C1 scheint zudem eine regulative, möglicherweise Spezifität vermittelnde Funktion für das Apo B mRNA Editing zu haben.