PIK3CA Hotspot Mutationen im Speichel als diagnostischer Marker beim oralem Plattenepithelkarzinom

Abstract

Zielsetzung: Ziel der vorliegenden Studie war der repräsentative Nachweis von PIK3CA Mutationsprofilen in Tumorproben des oralen Plattenepithelkarzinoms und in den dazugehörigen präoperativ gewonnenen Speichelproben. Die Entdeckung von PIK3CA Hotspot Mutationen in oralen Plattenepithelkarzinomen und deren gleichzeitiges Auftreten im Speichel könnte den Nutzen von LB als geeignetes Instrument für die nicht-invasive Früherkennung und Nachsorge von Patienten mit oralem Plattenepithelkarzinom aufzeigen. Material und Methoden: Von 29 Patienten, bei denen ein primäres orales Plattenepithelkarzinom im operablen Stadium diagnostiziert wurde, wurden Speichelproben präoperativ gewonnen und Gewebeproben während der Tumorresektion entnommen. Die Tumor-DNA wurde sowohl aus Gewebe- als auch aus Speichelproben nach Standardprocedere extrahiert. Alle Proben wurden auf DNA-Quantität und -Qualität kontrolliert, und die genetische Übereinstimmung der Probenpaare bestätigt. Der Variantennachweis erfolgte mit dem MassARRAY® System, einer Massenspektrometrie zur Analyse genetischer Basenfolgen. Die Mutationsanalyse in der DNA aus dem Tumorgewebe und aus den Speichelproben wurde mit dem ClearSEEK™ PIK3CA Panel durchgeführt, das 20 Hotspot Mutationen in PIK3CA erfasst. Zur Bestätigung der erfassten Mutationen wurden die Proben ebenso mit dem UltraSEEK® Lung Panel analysiert, das eine sensitivere Nachweisgrenze aufweist, aber weniger PIK3CA Varianten erfasst. Ergebnisse: Insgesamt wurde in sieben der 29 Tumorgewebeproben (24 %) durch ClearSEEK™ eine PIK3CA Variante gefunden. UltraSEEK® bestätigte diese Varianten zusätzlich in vier dieser sieben positiven Gewebeproben. Von den drei Varianten, die von UltraSEEK® nicht erkannt wurden, waren zwei nicht im Panel enthalten und eine war zwar enthalten, wurde aber nicht erkannt. Von den sieben im Gewebe gefundenen Varianten konnten fünf auch in den passenden Speichelproben (71 %) nachgewiesen werden, entweder mit ClearSEEK™ oder mit UltraSEEK®. Schlussfolgerung: Der Nachweis von PIK3CA Hotspot Mutationen beim oralen Plattenepithelkarzinom und korrespondierenden Speichelproben unterstreicht den potenziellen Nutzen von LB für die Diagnostik des oralen Plattenepithelkarzinoms insbesondere im Hinblick auf die Tumornachsorge und Rezidiverkennung.

Background/Aim: This study aimed at the analogous detection of PIK3CA mutations, common in oral squamous cell carcinoma (OSCC), in matched tumor and saliva samples. Patients and Methods: Tissue and saliva samples were obtained from 29 patients diagnosed with primary OSCC. Saliva samples were obtained preoperatively; tissue specimens were acquired during tumor resection. Tumor DNA was extracted from both tissue and saliva samples. All samples were controlled for DNA quantity and quality and genetic matching of sample pairs was confirmed using the iPlex Pro Exome QC Panel. Variant detection was performed using the MassARRAY® System, a mass-spectrometry based detection system. Mutational analysis in saliva and tissue tumor DNA was made using the multiplexed ClearSEEK™ PIK3CA Panel covering 20 hotspot mutations in PIK3CA and the UltraSEEK® Lung Panel, with a more sensitive limit of detection but covering less PIK3CA variants. Results: Overall, a PIK3CA variant was found in seven of the 29 tumor tissue samples (24%) by ClearSEEK™; UltraSEEK® additionally confirmed the variant in four of these seven positive tissue samples. Of the three variants not detected by UltraSEEK®, two were not included in the panel and one was included but not detected. Of the seven variants found in tissue, five could also be detected in the matching saliva samples (71%), either by utilizing ClearSEEK™ or UltraSEEK®. Conclusion: The detection of PIK3CA hotspot mutations in OSCC and their simultaneous occurrence in saliva underline the potential benefit of liquid biopsies for non-invasive cancer detection and follow-up care of OSCC patients.